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          2. 【AbMole科研快報】阻斷AMPK-ULK1通路介導的自噬在BC中促進細胞凋亡

            來源: AbMole中國   2020-11-30   訪問量:119評論(0)

            AbMole精研抑制劑十年,最新的科研動態不斷與您分享。本期與您分享的是:阻斷AMPK-ULK1通路介導的自噬,在BC中促進細胞凋亡以增加阿霉素的敏感性的一項體外研究

            自噬通量的激活促進乳腺癌細胞對現有化療藥物的耐藥性,嚴重限制了化療藥物的療效,導致臨床BC細胞的復發。然而,人們對于其詳細的機制仍未完全了解。本研究中,證實AMPK-ULK1信號在體外介導了保護性自噬,通過抑制該信號能夠提高阿霉素的藥物敏感性。 具體實驗中,研究人員采用細胞計數(CCK-8)試驗和集落形成試驗評價細胞增殖能力。利用臺盤藍染色法檢測細胞活力,Annexin V-FITC/ PI雙染色法檢測細胞凋亡。通過電鏡觀察并拍攝BC細胞自噬體。同時,利用Western Blot分析在蛋白水平上檢測基因表達。

            將親代阿霉素敏感的BC (DS-BC)細胞暴露于逐步增加濃度的阿霉素環境中,建立耐阿霉素的BC (DR-BC)細胞。與DS-BC細胞相比,DR -BC對大劑量阿霉素刺激的耐受性顯著增強(P<0.05)。有趣的是,在DR-BC細胞中,高劑量阿霉素特異性地增加LC3B-II/I比值,促進自噬體的形成,降低p62的表達水平。在DS-BC細胞中,則沒有發現類似的自噬促進作用。引入自噬抑制劑3-MA后增加了大劑量阿霉素對DR-BC細胞的殺傷作用(P<0.05)。此外,研究證實了大劑量阿霉素通過激活AMPK-ULK1通路,在DR-BC細胞中觸發了保護性自噬。在功能上,大劑量阿霉素可增加DR-BC細胞磷酸化AMPK (P -AMPK)和ULK1 (P -ULK1)的表達水平,激活AMPK-ULK1通路(P<0.05)。引入AMPK抑制劑(compound C)和ULK1 抑制劑(SBI-0206965)可阻斷細胞自噬,促進大劑量阿霉素處理的DR-BC細胞死亡,減緩細胞生長(P<0.05)。

            結論:體外數據表明,阻斷AMPK-ULK1信號級聯介導的保護性自噬可能是增加阿霉素對抗BC敏感性的潛在策略。

            CCK-8試劑盒 (Abmole, M4839) 為MTT 法的替代方法,是一種基于WST(水溶性四唑鹽,化學名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。

            作者在研究過程中,首先建立了耐藥細胞株。通過低劑量阿霉素連續逐級增加濃度,從親原代DS-BC細胞中誘導出耐阿霉素的DR-BC細胞。在A-D中,采用CCK-8法檢測細胞增殖能力,獲得了優質的數據結果。其中,CCK-8試劑盒購自Abmol。CCK試劑盒使用方便,省去了洗滌細胞,不需要同位素和有機溶劑;檢測靈敏度高,甚至可以測定較低細胞密度;其重復性也優于MTT法。

            鳴謝:Yu, Libo & Shi, Qingtao & Jin, Yan & Liu, Zhixin & Li, Jiaxin & Sun, Wenzhou. (2020). Blockage of AMPK-ULK1 pathway mediated autophagy promotes cell apoptosis to increase doxorubicin sensitivity in breast cancer (BC) cells: an in vitro study. 10.21203/rs.3.rs-49604/v2.



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