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          2. 阿拉丁細胞裂解液選型與配制

            來源: 上海阿拉丁生化科技股份有限公司   2020-12-14   訪問量:910評論(0)


            阿拉丁細胞裂解液選型與配制

            細胞裂解液是以去污劑為基礎、針對細胞裂解應用、成分優化的緩沖液和試劑。對于不同細胞類型、蛋白定位、以及下游應用,需要不同的細胞裂解液進行有效的細胞裂解和蛋白提取。

            去污劑主要類型及其作用

            根據去污劑類型、蛋白定位、及目的蛋白性質來確定細胞裂解液的種類。

            去污劑主要類型及其作用

            類型帶電情況作用應用舉例
            離子型
            (變性去污劑)
            帶電荷的
            陰離子性或陽離子性的
            破壞蛋白活性、功能及蛋白間相互作用力總蛋白提取
            SDS-PAGE
            SDS
            ETMAB
            非離子型
            (非變性去污劑)
            不帶電荷較少破壞活性及功能,可維持蛋白間作用力酶學檢測
            免疫檢測
            Triton X-100
            Tween 20
            NP-40
            兩性離子型具有正電荷和負電荷的基團
            但凈電荷為零
            兼具離子型和非離子型去污劑的特點,能破壞蛋白質間相互作用 CHAPS
            CHAPSO

            根據蛋白定位不同推薦的裂解液種類

            蛋白定位
            全細胞
            細胞質
            (可溶性蛋白)
            細胞質
            (細胞骨架等不溶性蛋白)
            細胞膜
            細胞核
            線粒體
            裂解液種類
            NP-40或RIPA
            Tris-HCl
            Tris-Triton
            NP-40或RIPA
            RIPA
            RIPA

            常用細胞裂解液

            #RIPA緩沖液

            最初以其開發的測定方法(放射免疫沉淀測定法)來命名,是兩種離子去污劑和一種非離子去污劑的Tris緩沖液,也是哺乳動物細胞或軟組織裂解和蛋白提取的常用選擇。

            常用配方:

            25 mM Tris-HCl, pH 7.6

            150 mM NaCl

            1% NP-40

            1%去氧膽酸鈉

            0.1%十二烷基硫酸鈉(SDS)

            兼容應用:

            BCA及去污劑兼容型的Bradford試劑蛋白濃度測定、SDS-PAGE、蛋白質免疫印跡、ELISA及純化等。

            #IP緩沖液

            是一種修飾型的RIPA緩沖液(不含SDS),可有效溶解細胞蛋白,但無法釋放基因組DNA或破壞蛋白復合物,可兼容下游的免疫沉淀或者親和吸附的應用。

            常用配方:

            25 mM Tris-HCl, pH 7.4

            150 mM NaCl

            1% NP-40

            1% mM EDTA

            5% 甘油

            兼容應用:

            BCA及去污劑兼容型Bradford試劑蛋白濃度測定、蛋白質免疫印跡、ELISA、免疫沉淀及報告基因檢測。

            #NP-40緩沖液

            NP-40是一種非離子型聚氧乙烯表面活性劑,常作為細胞裂解緩沖液或其他用于提取和溶解蛋白質的溶液的組分。

            常用配方:

            150mM NaCl

            1.0% NP-40

            50mM Tris-HCl,pH值8.0

            兼容應用:

            BCA及去污劑兼容型Bradford試劑蛋白濃度測定、蛋白質免疫印跡、ELISA、免疫沉淀。

            #Tris-Triton緩沖液

            非離子型表面活性劑,常用作細胞裂解緩沖液或其他用于提取和溶解蛋白質的溶液。Trition X-100效果介于NP-40和SDS之間。

            常用配方:

            10mM 三羥甲基氨基甲烷(Tris),pH值7.4

            100mM NaCl

            1mM EDTA

            1mM EGTA

            1% Triton X-100

            10% 甘油

            0.1% SDS

            0.5% 去氧膽酸鈉

            兼容應用:

            BCA及去污劑兼容型Bradford試劑蛋白濃度測定、蛋白質免疫印跡、ELISA、免疫沉淀。

            產品列表

            產品號產品名稱規格Cas包裝
            C111538 氯化鈉用于細胞和昆蟲細胞培養,≥99.5%(T)7647-14-5500g,2.5kg
            N105507NP-40~10% in H2O9016-45-9 25ml,100ml,
            500ml,5L
            T109026 Triton X-100生化試劑級9002-93-1100ml,500ml,1L,4L
            T105291三(羥甲基)氨基甲烷鹽酸鹽(Tris HCl)用于分子生物學和細胞培養,≥99.0%(AT)1185-53-1100g,500g
            S104198脫氧膽酸鈉98%302-95-425g,100g,
            250g,500g
            S118591十二烷基硫酸鈉(SDS)分子生物學級,≥98.5% (GC)151-21-3 25g,100g,
            500g
            T110602三(羥甲基)氨基甲烷(Tris)細胞培養級,≥99.9%(T)77-86-15kg
            E112489乙二胺四乙酸(EDTA)99%,用于細胞培養60-00-4100g,500g
            E1044343,6-二氧雜-1,8-辛二胺四乙酸(EGTA)用于分子生物學,≥99.0%67-42-5 25g,100g,
            500g
            G118851甘油無菌,for molecular biology, ≥99%56-81-5100ml



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