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          2. 細胞培養篇,選到無菌耗材避免細菌污染

            來源: 上海聯碩生物科技有限公司   2020-12-29   訪問量:382評論(0)

            養細胞的人怕的就是細胞污染,細胞一污染,一夜回到解放前,一切都得從頭開始,尤其是新手小白,幾乎都逃不過細胞污染,避免細胞污染,重要的是操作前和操作時。

            1. 操作前,要保證所有的用品無菌,移液槍槍頭、離心管、培養瓶、PBS、培養基、血清等。 高壓滅菌,一般要提前一天高壓滅菌,滅菌結束后放烘箱烘干,為確保充分烘干,一般需要過夜。要確保一定被高壓過,像我們實驗室就發生過沒被高壓的槍頭盒放烘箱里了,從高壓鍋里拿瓶子時一定要擰緊瓶蓋,否則就白壓了。

            2.操作前紫外燈照射超凈臺20min左右。實驗前打開超凈臺的通風,用酒精棉球將臺面擦一遍,所有進入超凈臺的東西都要噴酒精。

            3.操作時,所有的玻璃瓶打開前都需在酒精燈上烤一圈,畢竟“病從口入”嘛,將瓶蓋放在左側(清潔區),保證操作時不會從上方經過。

            4.操作時注意槍頭,做到懸空加樣,尤其是給非無菌的離心管里加東西,給含有細胞的皿里加東西,如你從玻璃瓶里給一個含有細胞的培養皿里加培養基,那么你的槍頭就不能伸到培養皿的液體里,否則你的培養基就污染了,除非你每次換槍頭。

            5.注意袖口,胳膊,切記不要從打開的瓶,皿上面越過,防止落菌。

            6.手拿所有的蓋子時,一定不要碰到里面。

            7.實驗結束后,用酒精燈燒所有的瓶口、蓋子,擰緊,用封口膜封好,我們的封口膜一般是提前剪好泡在含有酒精的瓶子里。 一般細胞污染分為細菌、真菌、支原體,支原體在顯微鏡下肉眼看不到,底下圖一為細菌污染,圖二為真菌-念珠菌污染

            細菌污染有時和細胞碎片不容易區別,在高倍鏡下都會看到黑色小點在做布朗運動,但是細胞碎片大小不一,培養基清澈透亮,而細菌污染的黑點大小差不多,培養基渾濁,有泥沙感



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